產品內容：

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存（強腐蝕性，強氧化性）。

試劑二：液體 7mL×1 瓶，4℃保存。

   試劑三：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 5mL 蒸餾水，溶解后再加入 2.5mL 試劑二，混勻。

標準品：液體 1mL×1 支，1mmol/L 無機磷標準液，4℃保存。

產品說明：

磷的存在形態包括無機磷與有機磷。無機磷主要指磷酸根，參與生物體內多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等。通過測定總磷與無機磷含量即可了解作物對磷的利用率，進而為合理施肥提供依據。

總磷經消化后，轉化成無機磷。鉬藍法是測定無機磷含量的經典方法，一定條件下，鉬藍與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質，通過測定 660nm 光吸收，即可計算無機磷含量，進而可計算出組織中總磷含量。

自備儀器和用品：

離心機、水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、蒸餾水和濃硫酸。

操作步驟：

一、有機磷消化：

取帶蓋試管，加入精確稱取的約 0.1g 組織，加濃硫酸 1 mL，蓋緊（防止水分散失）后沸水浴10min 左右，待溶液呈黑色或棕色時取出。稍冷后，加試劑一 200μL，充分混勻，蓋緊后繼續沸水浴，直到溶液呈透明狀，取出室溫冷卻后，加蒸餾水 3.8 mL，充分混勻；室溫，10000rpm，離心10min，取上清液，待測。

二、測定：

1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長到 660 nm，蒸餾水調零。

2.打開水浴鍋，調節溫度到 40℃。

3.測定：

混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，分別記為 A 空白

管、A 標準管、A 測定管。三、組織總磷含量計算：

總磷含量(mmol /g FW)= [C 標準液×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×V 總÷W

=0.005×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)÷W

C 標準液：1 mmol/L；V 總：上清液總體積，5 mL=0.005 L。W：樣品質量，g。

注意事項：

1、試劑三需臨用前配制，限當天使用。

2、測定前先用 1~2 個樣品做預實驗，如吸光值大于 1 時，需用蒸餾水做相應稀釋。