注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。測定意義

微量法 100T/48S

植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉化為可供有機體利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對環境的污染，改善營養成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應用價值。

測定原理

植酸酶在一定溫度和 pH 值條件下，水解底物植酸鈉生成無機磷與肌醇衍生物，無機磷在酸性環境中與鉬酸銨顯色劑反應生成藍色復合物，在 700nm 處有特征吸收峰，根據 700nm 處吸光值變化可計算得植酸酶活性。

天平、低溫離心機、酶標儀、96 孔板、恒溫水浴鍋，甲苯（不允許快遞）。

緩沖液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加緩沖液 30mL 配制，現用現配；用不完的試劑

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

顯色劑：粉劑×6 管，4℃避光保存，臨用前根據用量每瓶加 0.4mL 雙蒸水溶解，再加 1.6mL

樣本處理

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干，過 30~50 目篩。

	對照管	測定管
樣本（g）	0.03	0.03
甲苯	20	20
振蕩混勻，室溫放置 15min
緩沖液（μL）	500
試劑一（μL）		500
混勻，37℃孵育 24h，10000g，4℃離心 5min，取上清
上清	100	100
顯色劑（μL）	100	100
混勻，靜置 15min，測定 700nm 處吸光值，△A=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。

酶活性計算公式

標準曲線：y = 0.8795x + 0.0084，R2 = 0.9977；x 為標準品濃度（μmol/mL），y 為吸光值△A。酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每克土樣每小時從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/d /g 土樣）=（△A-0.0084）÷0.8795×V 反總÷W÷T

=19.68×（△A-0.0084）

V 反總：反應總體積，0.52mL；T：反應時間，1d；W：樣本質量，0.03g。

1、顯色劑需要臨用前根據用量配制，每一瓶是 10 個樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經污染或者試劑過期，應放棄使用。

2、ΔA 線性范圍為 0.01-0.5。