酸性土壤速效磷測(cè)試盒（微量法）
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酸性土壤速效磷含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：4073
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 125mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，室溫保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：10μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 1mL×1 支，4℃保存。工作液：35mL 棕色空瓶×1 瓶。
微量法
工作液（定磷劑）的配制：按 H2O：試劑一：試劑二：試劑三=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液應(yīng)為淺黃色。若變色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產(chǎn)品說(shuō)明：
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷、一部分微溶性的無(wú)機(jī)磷和易礦化的有機(jī)磷等，土壤中速效磷是限制植物生長(zhǎng)主要因子之一。
用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷，鉬藍(lán)與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定
660nm 光吸收，即可計(jì)算磷含量。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、臺(tái)式離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、20 目篩、漩渦震蕩儀、EP 管、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理：
新鮮土樣風(fēng)干，過(guò) 20 目篩，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：10-20 的比例（建議稱取約 0.05g 土樣，加入 1mL 提取液），振蕩提取 1h，10000g，25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。 二、測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將 10μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為 6、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表：(在 1.5mL 離心管中或 96 孔板依次加入下列試劑)
測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
樣品（μL） | 20 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） | - | 20 | - |
提取液（μL） | 40 | 40 | 60 |
工作液（μL） | 80 | 80 | 80 |
H2O（μL） | 60 | 60 | 60 |
充分混勻，25℃靜置 30min，將液體置于微量玻璃比色皿/96 孔板中，測(cè)定 660nm 處吸光值 A，分別記為 A 測(cè)定管、A 標(biāo)準(zhǔn)管和 A 空白管，△A=A 測(cè)定管-A 空白管，△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，空白管只需測(cè)一次。 | |||
三、速效磷含量計(jì)算：
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）
2、 速效磷含量的計(jì)算：
速效磷含量（μmol /g 鮮重）=x×V 樣÷（V 樣×W÷V 樣總）=x÷W。
V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1、 工作液（定磷劑）應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍(lán)則均為失效。
2、 此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管或 EP 管等試驗(yàn)器材均要求嚴(yán)格無(wú)磷。
3、 顯色結(jié)束后應(yīng)立即檢測(cè)。
4、 當(dāng)△A 大于 1 時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
5、 用 96 孔板檢測(cè)時(shí)，注意板孔中的液體有無(wú)氣泡，如有氣泡應(yīng)排除氣泡后再測(cè)定 OD 值。
