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自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

   操作注意事項

4.   試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

5.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

6.   濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣本實際濃度。

7.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

8.   所有液體組分使用前充分搖勻。

   試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、3、6、12、24、48 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.   自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

   操作步驟

3.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

4.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

5.   樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

6.   除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

7.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

8.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

9.   每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

   結果判斷

    繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

    

   試劑盒性能

10.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。

11.  靈敏度：最低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

12.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

13.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

14.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

15.  有效期：6個月

    免責聲明

16.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

      嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。